Instituto de Patología y Biología Molecular Arias Stella

Boletín Médico

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Captura de Híbridos

Cómo utilizar la tecnología de Digene Hybrid Capture ®2

La tecnología de captura de Híbridos Hybrid Capture ® 2 de DIGENE identifica directamente los ácidos nucleicos del Virus Papiloma Humano (PVH) alcanzando niveles notables de dirección, siendo un procedimiento simple y accesible, ideal para la práctica de rutina.

Por qué detectar el Virus Papiloma Humano:

	Está establecido que el Virus Papiloma Humano (PVH) es un factor causal en el desarrollo del cáncer cervical.1

	Se le ha identificado en un 99.8 % de los carcinomas cervicales.3

	La infección por PVH predice el desarrollo posterior de lesiones escamosas intraepiteliales.4

	Una infección persistente con PVH de alto riesgo es necesaria para el desarrollo de neoplasias intraepiteliales cervicales o Ca in situ,5 así, las mujeres están en riesgo de progresión sólo si la infección con PVH de alto riesgo persiste, incrementando en 250 veces el riesgo relativo decáncer cervical.4

Cómo funciona el sistema de Captura de Híbridos Hybrid Capture ®2 de Digene:

La tecnología de Captura de Híbridos es un método cualitativo que consiste en la hibridización del DNA de la muestra a estudiar con sondas de RNA específicas para 18 tipos virales de alto y bajo riesgo. Estos híbridos DNA:RNA son capturados sobre una superficie con anticuerpos conjugados con material quimo luminiscente que emite señales de luz al reconocer el DNA del PVH.

Liberación de ácidos nucléicos
Los especimenes de las muestras se combinan con una solución básica que fragmenta a las bacterias o virus y libera el DNA blanco. No requiere preparación especial del espécimen.
Hibridización de la sonda de RNA con el DNA blanco
El DNA blanco se combina con sondas de RNA específicas, creando los h íbridoa RNA:DNA.
Captura de Híbridos
Los híbridos RNA:DNA formados son capturados sobre una fase sólida cubierta con anticuerpos de captura universal específicos para esos híbridos.
Tinción para la detección
Los híbridos RNA:DNH capturados son detectados con múltiples anticuerpos conjugados con fosfatasa alcalina. La señal resultante puede ser amplificada al menos 3000 veces.
Detección, lectura e interpretación de resultados
La unión a la fosfatasa alcalina es detectada con un sustrato quimoluminiscente de dioxetano. La digestión producida por la fosfatasa alcalina sobre el sustrato produce luz que es medida con un luminómetro en Unidades Relativas de Luz (RLU por sus siglas en inglés).

Cómo se utiliza el sistema Hybrid Capture ®2 de Digene:

El método de captura de híbridos Hybrid Capture ®2 de DIGENE se aplica directamente sobre muestras de extendidos cervicales tomadas con el mismo procedimiento que el extendido cervical en base líquida para el papanicolaou, actualmente de uso rutinario en numerosos consultorios ginecológicos en Lima.

Alternativamente, puede tomarse una sola muestra para realizar el diagnóstico de PVH y el papanicolaou, si éste se realiza con el método de extendido cervical en base líquida (ver artículo: Extendido Cervical en Base Líquida).

Colección de la muestra :

Se realiza en las visitas ginecológicas de rutina utilizando únicamente el Kit Collector y siguiendo cuidadosamente las instrucciones y recomendaciones siguientes:

Vulva

1	El material del introito vulvar puede ser colectado directamente con el cepillo.

2	Inmediatamente después de la colecta, introducir el cepillo en el tubo con la solución conservadora.

3	Romper la varilla del cepillo o hisopo.

4	Rotular el tubo.

5	Agitar el tubo durante 30 seg. aproximadamente para homogeneizar la muestra.

6	Para tomar muestras de otras regiones, éstas deben ser humedecidas con suero fisiológico para efectuar el raspado con una laminilla de vidrio o una hoja de bisturí. Luego, con el cepillo se recoge el material y se coloca en el interior del tubo, efectuando los pasos 3 y 4.

Cuello uterino y vagina

Exfoliado celular

1	Es necesario que la paciente se encuentre en abstinencia sexual por lo menos tres días y no estar menstruando.

2	No efectuar tacto vaginal, colposcopía o asepsia previa.

3	La presencia de sangre (no menstrual) o contenido vaginal no anómalo no altera el resultado.

4	Si está indicada, la toma del papanicolaou debe preceder la toma de muestra para la Captura de Híbridos.

5	Retirar con un algodón o gasa el exceso de moco alrededor del orificio externo y del exocérvix.

6	Introducir el cepillo en el canal endocervical y girarlo unas 5 veces en sentido horario. Luego, recoger muestras del endocérvix y de las paredes vaginales.

7	Inmediatamente después de la colecta, introducir el cepillo en el tubo que contiene la solución conservadora.

8	Romper la varilla del cepillo.

9	Rotular el tubo.

10	Agitar el tubo durante 30 seg. Aproximadamente para homogenizar la muestra.

11	El material colectado debe ser enviado al laboratorio a la brevedad posible. A temperatura ambiente, la muestra es viable por 15 días. Si el tiempo entre la colecta y la llegada al laboratorio va a ser mayor, entonces se recomienda mantenerlo en refrigeración entre 2 a 8 ºC.

Ventajas del sistema de Captura de Híbridos Hybrid Capture ®2 de Digene:

Sensibilidad: 98%

Con la utilización del método de extendido cervical y el sistema Hybrid Capture ®2 mejora la confianza en el diagnóstico y el manejo de la pacientes con ASCUS. Numerosos estudios han demostrado una mayor sensibilidad en la detección de lesiones cervicales de lato grado en comparación con los métodos convencionales.5

Valor predictivo negativo: 99%

Entre las pacientes con ASCUS, el resultado negativo para VPH identifica a aquellas cuya citología muy probablemente retornará a la normalidad.

Beneficios Clínicos del diagnóstico del VPH

	Utilizado sobre las muestras obtenidas para el extendido cervical en base líquida, minimiza el riesgo de enfermedad no diagnosticada.

	Se obtienen resultados inmediatos, facilitando a las mujeres HPV-negativas, regresar al manejo de rutina con un alto grado de confiabilidad reduciendo la ansiedad en mujeres HPV-negativas con ASC-US o ASC-H en sus extendidos cervicales.

	Reduce consultas y procedimientos innecesarios.

	Ayuda a determinar la necesidad de realizar la colposcopía siguiendo el algoritmo de manejo propuesto.

Se recomienda el estudio para HPV a aquellas pacientes con ASC-US y ASC-H en sus extendidos cervicales.

Aquellas que resulten HPV-negativas continuarán el manejo de seguimiento de rutina con un alto grado de confiabilidad pues está demostrado que su riesgo de desarrollar cáncer cervical es muy reducido. Sólo las pacientes que resulten HPV-positivas requieren ser referidas para colposcopía.

Referencias:

1	National Institutes of Health (NIH). Consensus Development Conference Statement, 1996.
2	2001 Consensus Guidelines for the Management of Women with Cervical Cytological Abnormalities Thomas C. Wright, Jr. MD; J. Thomas Cox, MD; L. Stewart Massad, MD; Leo B. Twiggs, MD; Edward J. Wilkinson, MD; for the 2001 ASCCP-Sponsored Consensus Conference JAMA. 2002, 287: 2120-2129.
3	Bosch FX, European HPV Clinical Summit Meeting, January 1998.
4	Liaw K-L, Glass AG, Manos MM, et al. Detection of Human Papillomavirus DNA in Citologycally Normal Women and Subsequent Cervical Squamous Intraepithelial Lesions. J Nat Cancer Inst. 1999; 91: 954-960.
5	Lenhart S. The U.S. national cervical cancer public education campaign. In: New Approaches to the Detection and Elimination of Cervical Cancer, a report of the European HPV Clinical Summit Meeting, 1999.
6	Clavel C, Masure M, Bory J-P, et al. Hybrid Capture II-based human papillomavirus detection, a sensitive test to detect in routine high-grade cervical lesions. Brit J Cancer 1999; 80(9): 1306-1311.